3M測試片
1.操作方法
①未開封時,置于≤8℃冷藏,注意外包裝上的保存期限,打開包裝時,應在室溫條件下。已開封的,應用壓條或膠帶封口后,置于室溫,一個月內用完。
②稱取樣品置于無菌均質袋或均質杯中,加入無菌稀釋液攪拌或均質樣品,并用稀鹽酸或稀氫氧化鈉調pH至6.5~7.2。
注意:無菌稀釋液不可使用含有檸檬酸鹽、酸性亞硫酸鹽或硫代硫酸鹽的緩沖液,這些稀釋液會抑制**的生長。
③將測試片置于平坦表面處,保持水平,揭開上層膜,移液器或滴管吸1ml樣液垂直滴加在測試片的正中央。然后將上層膜慢慢落下,盡量不要出現(xiàn)氣泡,切勿向下滾動上層膜。
④將壓板的圓形內凹面朝下,放置在上層膜的正中央,然后輕輕壓下,使樣液均勻覆蓋于圓形的培養(yǎng)基面積上,切不可扭轉壓板。
⑤拿起壓板,靜置1min以上等待培養(yǎng)基凝固。然后測試片的透明面朝上,*多可疊放20片,置于36℃培養(yǎng)48小時,并保持培養(yǎng)箱的濕度。
2.判讀3M測試片方法
①菌落總數(shù)測試片內,含有一種紅色指示染劑,可以使菌落呈現(xiàn)紅色便于計數(shù),計算所有紅色菌落,不論大小及顏色深淺。
②3M檢測片菌落計數(shù)的適宜計數(shù)范圍是25~250。
③測試片的計數(shù)面積約為20cm2。每一個黃色方框的面積是1cm2。當菌落總數(shù)超過250個時,為了估計菌落數(shù),可以選擇其中一個或幾個有代表性的小方框(1cm2)。計算平均菌落數(shù),然后再乘以20可得到測試片上的菌落數(shù)。
④當測試片上的菌落太多而無法進行計數(shù)時,記錄為“TNTC”。
⑤有很高數(shù)量的菌落,使整個生長區(qū)域變成粉色,或僅僅在生長邊緣區(qū)域觀察到單個菌落,記錄為“TNTC”。
⑥有很高的菌落數(shù)量,并且有時菌落會出現(xiàn)分布不均勻的情況,記錄為“TNTC”。
⑦可以看到直徑較大的菌落,并且可以計數(shù),但是仔細觀察時,會發(fā)現(xiàn)非常密集非常細小的菌落分布在計數(shù)區(qū)域內,此時記錄為“TNTC”。
⑧很少數(shù)量的菌種,會將測試片上的培養(yǎng)基液化,在計數(shù)區(qū)域內出現(xiàn)一個粉紅色的液化區(qū),此時不要記錄液化區(qū)內的紅點,應選擇沒有被液化區(qū)域內的菌落進行計數(shù),選取沒有液化部分的幾個有代表性的小方格(1cm2)。計算平均菌落數(shù),然后乘以20。得到結果。
⑨注意和樣品殘渣顆粒進行區(qū)。有些樣品中會含有一些紅色的殘渣顆粒,菌落應該是紅色規(guī)則的圓形,而顆粒的形狀是不規(guī)則的。如果樣品以紅色顆粒為主(比如辣椒粉),這類樣品的菌落總數(shù)檢測,不宜采用3M菌落總數(shù)測試片。
3M大腸桿菌/大腸菌群測試片
1.操作方法
操作方法與3M菌落總數(shù)測試片基本相同,只是不需要壓板,直接把1ml樣液加到中間紅色圓形區(qū)域內,然后將上層膜輕輕放下,盡量不要產生氣泡。然后可以輕輕的轉動一下紙片,使樣液可以均勻地分布在中間紅色的圓形區(qū)域內。
2.判讀方法
大腸菌群在紙片上呈現(xiàn)紅色菌落,緊貼著菌落有氣泡,大腸桿菌在紙片上呈藍色菌落緊貼菌落有氣泡。此時應注意區(qū)分只有紅色或藍色菌落而沒有氣泡的情況,或者氣泡不是緊貼著菌落,或者只有氣泡無菌落生長,都不應列入計數(shù)范圍。此外還應區(qū)別樣品殘渣和目標菌落。